login
Inicia sessió

register
Registra't

Cultura Científica

FIXACIÓ I TINCIÓ DE LES CÈL·LULES DE LA MUCOSA BUCAL.

FIXACIÓ I TINCIÓ DE LES CÈL·LULES DE LA MUCOSA BUCAL.

Autor/es

Teresa Miguel Iglesias

Objectiu

• Observar les principals parts de l’estructura d’una cèl·lula

• Utilitzar tècniques de fixació i tinció cel·lular

Material

• Escuradents o similar

• Blau de metilè

• Aigua destil·lada

• Etanol 96%

• Metanol

• Hematoxilina

• Eosina

• Orceïna B (orceïna acètica)

• Pinces de fusta

• Portaobjectes

• Cobreobjectes

• Aigua

• Microscopi

• Bec Bunsen

• Agulla emmanegada

Procediment amb blau de metilè

1) Amb la part plana d’un escuradents fregat la part interna de la boca.

2) Diposita el material recollit damunt d’un portaobjectes.

3) Fixació de la mostra (s’utilitza per aconseguir que la mostra mantingui la seva forma i així l’observació serà el més semblant possible a la realitat i sempre s’ha de fer abans de tintar el material biològic).

• Fixació a la flama: agafar el portaobjectes amb unes pinces de fusta per no cremar-se. Escalfar suaument la preparació amb la flama (es pot moure el portaobjectes ràpidament per sobre la flama). Comprovar que la temperatura del portaobjectes no sigui molt elevada.

4) Tinció: quan la mostra estigui ben seca afegir al damunt el colorant blau de metilè. Deixar passar un 2-3 minuts.

5) Rentar el colorant sobrant amb aigua. Per fer-ho inclinar el portaobjectes i deixar caure aigua suaument per l’extrem superior del portaobjectes, sense que l’aigua toqui directament el lloc on s’ha col·locat la mostra. Utilitzar un tros de paper per eixugar la part inferior del portaobjectes eliminant l’aigua sobrant.

6) Muntar la preparació afegint una goteta d’aigua sobre la mostra. A continuació col·locar el cobreobjectes deixant-lo caure molt lentament per a evitar la formació de gotes d’aire.

7) Observa la mostra a diferents augments.

Procediment amb hematoxilina - Eosina

1) Amb la part plana d’un escuradents fregat la part interna de la boca.

2) Diposita el material recollit damunt d’un portaobjectes.

3) Fixació de la mostra amb calor. Agafa el portaobjectes amb unes pinces de fusta per no cremar-te i escalfa suaument la preparació. No oblidis de comprovar que la temperatura del portaobjectes no sigui molt elevada.

4) Tenyeix la mostra amb hematoxilina (5 minuts). Renta la preparació afegint aigua sobre la mostra durant 10 minuts (viratge d’hematoxilina).

5) A continuació afegeix eosina (5 minuts) i torna a rentar la mostra amb aigua destil·lada.

6) En acabar cobreix la mostra amb el cobreobjectes deixant-lo caure molt lentament per a evitar la formació de gotes d’aire.

7) Observa la mostra a diferents augments .

Procediment amb orceïna B (possible observació del corpuscle de Barr)

1) Amb la part plana d’un escuradents fregat la part interna de la boca.

2) Diposita el material recollit damunt d’un portaobjectes.

3) Fixació de la mostra amb metanol durant 15 minuts. Per fer-ho afegeix el metanol cobrint la mostra totalment.

4) A continuació cobreix la mostra amb orceïna B durant 5 minuts.

5) Renta la mostra amb aigua de l’aixeta.

6) Observa la mostra al microscopi

Resultats i conclusions

El corpuscle de Barr també coneguts com a cromatina sexual X, són masses condensades de cromatina sexual, és troben en el nucli de les cel·lules de les femelles degut a un cromosoma inactiu. El corpuscle de Barr serveix per detreminar genèticament el sexe d'un individu depenent de que existeix o no una massa de cromatina en la superfície interna de la membrana nuclear.

Comentaris (0)07-02-2016 16:18:00

Extracció d'ADN

EXTRACCIÓ D'ADN

AUTOR/ES

Teresa Miguel Iglesias

OBJECTIU

Extracció d’ADN utilitzant processos mecànics (batedora).

MATERIAL

• Pèsols

• Batedora

• Rentavaixelles

• Sal (NaCl)

• Aigua destil·lada

• Alcohol 96º

• Bicarbonat sòdic

• Tub d’assaig

• Pipeta (per a l’alcohol)

• Embut i paper de filtre

• Proveta

• Vas de precipitats

PROCEDIMENT

1.Preparació de la solució tampó de lisi (intenta que tot estigui molt fred posant els ingredients a la nevera o envoltats de gel): En un vas de precipitats: 120 ml d’aigua destil·lada (o mineral) + 1,5 g de sal de taula (1 cullerada petita) + 5 g de bicarbonat sòdic (3 cullerades petites). Mescla tots els components i finalment afegeix uns 5 ml de detergent líquid.

2.Solució d’ADN. En un recipient prepara 200 grams de pèsols amb aigua destil·lada (o mineral) i tritura’ls utilitzant la batedora per a rompre els teixits, les cèl·lules i els nuclis. Cal estar el temps suficient per a obtenir una mescla homogènia. Finalment amb un colador separa les restes sòlides del líquid (si tens temps pots fer un filtratge més fi utilitzant paper de filtre i un embut).

3.En un tub d’assaig gros afegeix 5 ml del triturat cel·lular amb 10 ml del tampó fred i agita el preparat durant al menys 2 minuts separant les restes vegetals que han pogut quedar (el procés ideal seria centrifugar a baixa velocitat durant 5 minuts)

4.A continuació torna a filtra la solució i retira uns 5 ml del brou molecular que has obtingut i aboca’ls en un tub d’assaig nou. En aquest tub afegeix 10 ml d’alcohol refredat a 0ºC. És important afegir l’alcohol molt poc a poc, deixant-lo caure amb suavitat per les parets del tub d’assaig. Cal intentar que l’alcohol no es barregi amb el filtrat formant una capa per sobre d’ell.

5.Deixa reposar la preparació.

6.Observaràs que, en passar el temps, apareixeran en la capa d’alcohol uns fils blancs. Es tracta de l’ADN dels pèsols

RESULTATS I CONCLUSIONS

Afegim detergent I sal a la nostra preparació per rompre les membranes plasmàtiques I les membranes nuclears de les cel·lules.

Comentaris (0)03-02-2016 21:07:50

Grup de Cultura Científica. 1r Batx.

Aquest blog és per l'assignatura de Cultura Científica aniré pujant les meves pràctiques del laboratori.

Comentaris (0)06-11-2015 09:39:27

Pràctica de laboratori. Tinció de Felhing

RECONEIXEMENT DE GLÚCIDS


Objectiu

  • Reconèixer alguns glúcids pel seu caràcter reductor


Material

  • Gradeta amb 2 tubs d'assaig (seran per la solució de glucosa i la de midó)

  • Rotuladors per escriure sobre vidre

  • 1 pinces de fusta

  • Bec de Bunsen + encenedor

  • Reactiu de Fehling A i B (solució conjunta)

  • Pipetes (una pel reactiu Fehling A i un altra pel Fehling B i una tercera per a la solució final de Fehling)

  • Solució de glucosa: serà conjunta per a tota la classe. Apuntau les quantitats de solut i dissolvent utilitzades.

  • Solució de midó: : serà conjunta per a tota la classe. Apuntau les quantitats de solut i dissolvent utilitzades.


Fonament químic de les proves

Reactiu de Fehling:

Una de les propietats més destacades dels monosacàrids és el seu poder reductor que es deu al grup carbonil (aldehid o cetona: C=O) de la seva molècula.

En aquesta pràctica utilitzarem el reactiu de Fehling. Aquest reactiu es tindrà que preparar abans de realitzar la pràctica ja que consta de dos solucions separades que es mesclen en el moment d'utilitzar-les.

La solució de Fehling A (blava) és de sulfat cúpric alcalí i la solució de Fehling B (incolora) és de tartrat sòdic-potàssic. En mesclar les dues solucions, es forma hidròxid cúpric de color blau intens.



Què passa químicament en la reacció de la glucosa i el midó amb el reactiu de Fehling?

La glucosa és un glúcid monosacàrid i reacciona amb la prova de Fehling. El grup carbonil de la glucosa (-COH) s’oxidarà passant a àcid carboxílic (-COOH). El procés s’evidenciarà per un canvi de coloració on el color blau del reactiu de Fehling formarà un precipitat groc (òxid cuprós hidratat) i després passarà a ser de color vermell teula (òxid cuprós anhidre) en continuar l'ebullició.

El midí és un glúcid polisacàrid i no reacciona amb la prova de Fehling (si amb la prova del Lugol que vam fer fa uns dies). Així doncs, el midó no s’oxida pel Fehling i per tant no observarem canvi de color de blau a vermell en la reacció química.







Procediment

  1. Per a tota la classe, en dos vasos de precipitats prepararem les dissolucions problema: una dissolució amb glucosa i una amb midó. Anota les quantitats d’aigua, midó i glucosa de cada dissolució.

  2. Amb els rotuladors marcarem els tubs d’assaig amb números 1 (solució de midó) i 2 (solució de glucosa)

  3. En el tub d’assaig número 1 afegeix 3 ml de la solució de midó i en el tub 2 afegeix 3 ml de la solució de glucosa.

  4. A continuació afegeix a cada tub 2 ml. de la solució de Fehling.

  5. Escalfa cada tub d’assaig fins l’ebullició. Alerta! Segueix les recomanacions de seguretat que t’ha explicat la teua professora. Controla l’ebullició del contingut del tub d’assaig perquè no surti i utiliza les ulleres protectores.

  6. Observa i anota els resultats.


Resultats

  1. Omple la taula amb els resultats de les proves (positiu o negatiu).




FEHLING (+/-)

TUB ASSAIG 1

MIDÓ

Negatiu

TUB ASSAIG 2

GLUCOSA

Positiu



  1. Justifica els resultats obtinguts en la prova de Fehling

- Vam mesclar 3 ml de midó amb 2 ml de Fehling dins d'un tub d'assaig, i dins l'altre 3 ml de glucosa i 2 ml de Fehling

- Els vam escalfar amb el bec de Bunsen, i només va reaccionar la glucosa i es va posar de color vermell. El midó no va reaccionar i es va quedar de color blau.
  1. Observa la taula següents quins productes trobes que podríem donar positiu amb la prova de Fehling. Explica perquè.


ALIMENT

FEHLING

Coca-Cola zero

Positiu

Sacarina

Negatiu

Patata amb aigua


Coca-Cola

Positiu

Coca cola zero: la Coca-cola reaccionaria perquè du sucre

Sacarina: és un edulcorant, però no reaccionarà perquè no du sucre

Patata amb aigua: no se si reaccionarà, la patata du sucre i midó, però ajuntant-la amb aigua potser no reacciona pel midó o potser si pel sucre.

Coca-cola: la Coca-cola reaccionarà perquè du sucre


Comentaris (0)06-11-2015 09:27:15